Transcreener®常见问题解答

Transcreener®ADP分析试剂盒中有什么？

Transcreener®ADP分析试剂盒包含检测任何激酶或ATP酶反应产生的ADP的所有成分。Transcreener®ADP分析试剂盒配有ADP抗体、ADP远红色示踪剂、停止和检测缓冲液和ADP。使用者必须提供激酶、底物和激酶反应缓冲液。

如何在[ATP]<10µM的条件下进行分析？

Transcreener®ADP分析试剂盒将是正确的产品。有关运行分析的具体说明，请参阅我们的技术手册。


如何在[ATP]>10µM时进行分析？

Transcreener®ADP分析试剂盒将是正确的产品。有关运行分析的具体说明，请参阅我们的技术手册。


Transcreener®ADP分析是否适用于任何激酶？

对。Transcreener®ADP分析试剂盒是一种通用分析试剂盒，可与普通激酶缓冲液中纯化的酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶一起使用。该分析的实用性被扩展到包括非蛋白激酶，例如那些使用醇、羧基、含氮或磷酸基团作为受体的激酶。事实上，任何产生ADP的反应都适用于本试验。

什么样的受体底物可以用于此分析？

由于该分析是基于所有激酶反应中产生的ADP的一般检测，理论上可以使用任何类型（或大多数浓度）的激酶受体底物，包括肽、蛋白质、核苷、糖和脂质。磷酸化蛋白质和肽以及级联途径（即MAPK信号途径）中的非活性天然蛋白质也可在Transcreener®ADP分析中发挥良好作用。



Transcreener®ADP分析能否用于ATP酶药物开发？

对。Transcreener®ADP分析用于跟踪激酶和ATP酶反应的进展。激酶催化磷酸基从ATP转移到产生ADP的蛋白质、肽、脂质或小分子底物，ADP是不变的产物。在ATP酶反应过程中，磷酸基从ATP转移到水分子产生ADP，从而与ADP示踪剂竞争与抗ADP单克隆抗体的结合。

我需要什么样的仪器来执行Transcreener®ADP分析？

Transcreener®ADP分析需要能够执行荧光偏振、荧光强度或TR-FRET读数的仪器。荧光偏振（FP）需要足够的灵敏度才能与2.0nm荧光标记化合物一起工作。单击此处查看仪器兼容性表。


我应该用什么微量滴定板？

康宁®微孔板，目录#4514（384孔，黑色，圆底，低容量，聚苯乙烯，非结合表面）适用于Transcreener®FP分析。


对于TR-FRET分析，重要的是使用具有非结合表面的全白色分析板。我们推荐康宁384井板（目录#4513）。
FI分析板应为全黑色。康宁板目录#4514推荐用于384井型。对于96孔分析格式，应使用Greiner半面积板目录#3686。
贝尔布鲁克实验室还没有彻底测试所有可用的板。然而，含有非结合表面或低结合表面的平板被推荐用于检测酶反应过程中产生的产物，以提高反应效率。另外，向反应缓冲液中加入0.01%的Brij将进一步减少粘附在平板上的蛋白质。

在本文中了解有关使用哪种分析板的更多信息：确保分析成功：正确的分析板会产生所有差异
如何以及为什么要生成标准曲线？
ADP/ATP标准曲线允许最终用户将实验mP、FI或TR-FRET值转换为µM ADP，然后可用于计算转换的ATP百分比。ADP/ATP标准曲线通过保持腺苷浓度恒定来模拟激酶反应（随着ADP的产生，ATP相应地被耗尽）。有关如何制备标准曲线的说明，请参阅Transcreener®ADP分析技术手册。